小鼠肝脏原代细胞肝窦内皮细胞的怎么培养
小鼠肝脏原代细胞肝窦内皮细胞的怎么培养
肝脏是人体中最大的实质性器官，主要负责着体内脂类、糖类、蛋白质、和维生素等众多物质的代谢，是人体中的代谢工厂。此外，肝脏在体内还发挥着解毒、免疫、存储糖原和维生素、合成胆汁以及造血等功能，被称之为体内最繁忙的器官。肝脏的复杂功能的发挥依赖于组成肝脏的各种类型的细胞，肝脏细胞主要分成两类：肝实质细胞（HC）和非实质细胞（NPC）。前者是肝脏中最主要的细胞类型，占据肝脏体积约80%，发挥着肝脏中的绝大部分功能。非实质细胞主要包括肝窦内皮细胞（LSEC）、枯否细胞（KC）、肝星状细胞（HSC）以及其他一些免疫细胞等。目前，对肝脏细胞的研究往往集中于某一种类型的细胞。本研究同时构建了多种类型细胞的基因表达谱，通过肝脏细胞水平表达谱的全面解析，系统地发现肝脏细胞中表达的新基因或新亚型，深入地了解肝脏不同类型细胞的共性与特性，全新地认识细胞在肝脏器官中的分工与协作。 转录组和蛋白质组作为基因组后继补充研究对象，分别担当传递遗传信息和功能最终执行的角色。而蛋白质组鉴定覆盖度的范围往往是参照编码基因的数目，因此可寻求转录组水平的mRNA鉴定辅助蛋白质组的深度覆盖。除了覆盖度的优势以外，转录组水平在灵敏度和准确性方面具有无可比拟的优势，还可以更精确地鉴定到基因的可变剪接、RNA编辑等信息。目前，转录组测序（RNA-Seq）作为一项新一代测序技术，能在全基因组范围内以单碱基分辨率检测并定量转录片段，成为研究转录组表达谱的重要方法。 首先，我们首次构建了肝脏细胞水平的转录组表达谱。以C57BL/6小鼠动物为模型，采用流式细胞术完成肝脏3种类型细胞（HC、LSEC和KC）的分选，确保各类细胞纯度和活性分别达到95%和85%以上。对细胞提取的RNA，利用新一代测序RNA-Seq技术，每种类型细胞得到3G以上的数据量，满足深度测序目的。
完全培养基可以激活小鼠原代肝细胞吗
一、实验目的：通过直接消化法分离小鼠肝细胞进行原代培养，从而得到体外培养的小鼠肝细胞，进行相关实验研究。二、主要实验步骤：1、 将小白鼠引颈处死后于含有75%酒精的大烧杯中浸洗10秒钟。2、 用剪刀剪开小鼠腹部,迅速取出肝脏并将其放入装有4℃的含双抗的D- Hanks 液中进行漂洗2次，之后在培养皿中用眼科剪子将鼠肝组织剪成1mm3 左右的小块, 放入试管中， 用吸管吹打, 待组织沉淀后吸出上清, 如此反复3 次,最后一次清洗后，将试管放入离心机800rp/min离心4min。3、 将离心后的试管取出后弃上清， 加入10倍肝组织体积的含0.2% Ⅳ型胶原酶和1%PVP的消化液后，封口，4℃冰箱过夜。4、 次日检查肝组织是否消化完全，消化完全者可用吸管吹打散开, 若消化不完全而吹打不开者,可重于37 ℃消化15min。5、 将消化完全的悬液经200目不锈钢网过滤到培养皿中，之后将过滤后的悬液装到一个5ml离心管中，之后向过滤后的悬液中加入含10%新生牛血清的DMEM培养基到5ml, 于4℃冰箱中静置20min 。6、 用吸管弃除悬液, 加入DMEM培养基至5ml, 以1000 转/ 分离心4min , 弃上清，如此反复3 次。7、 最后离心完后再加入2ml含10%新生牛血清的DMEM完全培养基，收集肝细胞于培养瓶中，进行台盼蓝活细胞计数；8、 最后加入相同的完全培养基, 调整细胞密度至5×105/ml，于37℃、5%CO2条件下培养。10、10h 后首次换液, 换以含50ml/L的新生牛血清的DMEM培养液, 以后每48h换液一次并依次降低胎牛血清含量至1%。
dmem是什么培养基啊？
DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，即称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium）。作为开发无血清配方的基础，该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。
