蛋白质的常用检测方法
蛋白质测定的方法有双缩脲法、凯氏定氮法、紫外吸收法、酚试剂法等。 蛋白质测定是指通过物理或化学方法对蛋白质含量进行测定。蛋白质是构成人体细胞和组织的重要成分， 人体正常值一般是60～80g/L。蛋白质测定是生物化学和分子生物学研究中最常用、最基本的分析方法之一。蛋白质测定在临床上应用广泛，部分疾病可能导致人体蛋白质含量变化。其中患有多发性骨髓瘤、急性脱水、外伤性休克、肾病可导致人体蛋白质含量增加，患有肝脏疾病、严重烧伤、大出血、营养不良、长期消耗性疾病会导致人体蛋白质含量下降。蛋白质测定在临床上有助于相关疾病的诊断，但并不是绝对的，只是提供一个诊断方向。双缩脲法是检测蛋白质的一个比较简单的方法。这种检测方法的灵敏度比较低一点，但是速度却比较快，一般用20到30分钟的时间就能够有效地检测出人体内蛋白质的含量了。不过通过双缩脲法只能够检测出蛋白质含量多少，并不能够清楚的判断出是哪种蛋白质。因为这种方法检测的时候不同蛋白质的显色程度是相似的，所以就很难辨别了。
蛋白质的检测原理是什么？
双缩脲试剂检测蛋白质原理是双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度。双缩脲法测定蛋白质的优缺点：优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好，双缩脲试剂可以长期保存。缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。
