什么是涡旋混合器
漩涡混合器 漩涡混合器是一种将振荡和涡旋巧妙结合的实验室仪器,能够适用于多种混匀和漩涡振荡操作,使实验更加方便,快捷。 发展过程: 1.国内一般的振荡器和涡旋器是分开的,一台机器往往只能处理一项操作,大大限制了实验的过程,目前国外出现的混匀小精灵可以解决这种矛盾,它将振荡和涡旋巧妙的结合到一台机器上。它不但能混匀各种微量管、PCR板、深孔板和微孔板等实验室常用耗材,还具备 Vortex 振荡混匀各种试管的功能,大大方便了实验过程。但由于价格相对较高而没有被广泛使用。 2 维混匀操控:最新研究结果发现,转速 (rpm) 并非是有效混匀微量体积样品的唯一决定因素。更多的时候,完美的混匀往往发生在转速、混匀运转模式(例如,旋转)以及旋转半径等众多影响因素均被优化条件下。 混匀小精灵已完美地综合了各项影响因素,即 2 维混匀操控。 漩涡混合器的工作内容: ● 工作板 ● 96孔PCR板(带裙边,半高裙边,无裙边) ● 384孔PCR板 ● 96孔和384孔深孔板 ● MTP微孔板,酶标板 ● 微量离心管 ● 0.2ml PCR管,PCR排管 ● 0.5ml微量管 ● 1.5ml微量管 ● 2.0ml微量管 ● Vortex振荡混匀各种类型的试管 产品应用: 快速可控混匀使孔与孔/ 管与管之间实验条件均一化,因此可以提高重复性。 ● PCR 反应体系制备 ● 沉淀重悬(如 细菌、DNA、细胞培养沉淀) ● 孵育(ELISA 酶免分析) ● 蛋白染色定量(如Bradford、Lowry、BCA) ● 报告基因分析(如β- 半乳糖苷酶、荧光素酶分析) ● 酶反应体系预混 ● 振荡混匀各种试管 Mix Smart混匀小精灵标准配置包括三种试管支架: ● 96孔PCR板/管支架,适合0.2mlPCR管、PCR排管、96孔PCR板(半高裙边、无裙边) ● 0.5ml试管支架 ● 1.5/2.0ml试管支架 ● 96孔带裙边PCR板、384孔PCR板、微孔板、深孔板,可直接放入MixMate 混匀, 无需支架 技术参数: ● 电源:100~230,50-60Hz,功率:45W ● 尺寸:17*24*14cm ● 重量:4.5kg ● 噪音:<52 分贝 ● 混匀频率:300-3,000 rpm (以10rpm递增) ● Vortex 振荡混匀频率:3,500 rpm ● 混匀时间: 15秒到99小时59分钟,可连续运转 混匀小精灵
● 振荡和混匀半径:1.5mm(3mm振幅)
旋涡混合器的技术参数
设备安装:感谢您选择力辰科技多模块漩涡混合器,为获得更好的使用体验,请认真阅读本使用说 明书,并遵守安全操作规范! 1、工作环境的选择 注意!请按下面的要求选择工作环境: (1)工作环境应保持清洁、干燥; (2)避免阳光直射、剧烈的温度波动和空气对流; (3)尽可能远离房门、窗、散热器以及空调装置的出风口; (4)仪器应放置在水平、平稳的工作台上; (5)工作台应设置在受振动干扰少的地方; (6)应使仪器远离带有磁性或能产生磁场的物体及设备; (7)不得在具有爆炸性危险的区域内使用仪器; (8)不得长时间在高湿度或高粉尘的环境中使用仪器。 2、设备安装 (1)拆箱后,除去一切包装,取掉缓冲海绵; (2)将混合器置于稳定无振动的工作台上,尽可能水平; (3)将电源适配器输出端插在位于仪器后方电源插口内
漩涡混合器的介绍
多模块漩涡混合器,体积小巧,混合快速、彻底,能将附在管壁上的试液全部混匀,适用于一般试管、离心管、分液、漏斗内液体的混合均匀,广泛应用于生物化学,基因工程,医学等实验需求。力辰科技专注科学服务领域,提供一站式实验室产品与服务,提供通用仪器、分析仪器、物性测试、环境检测、仪器耗材等。一、产品特点1、LCD 大屏显示转速和时间,方便设定读取;2、适合短时间(点动)或长时间连续工作;3、直流无刷电机,寿命长,动力强劲,免维护;4、特制振头,韧性强,弹性足,使用寿命长;5、转速范围广,最大转速 3000rpm,无级调速;6、模块安装方便,偏心轴承设计经久耐用;7、采用优质脚垫,仪器稳定性好,运行噪音小。二、设备安装1、工作环境的选择 (注意!请按下面的要求选择工作环境)(1)工作环境应保持清洁、干燥;(2)避免阳光直射、剧烈的温度波动和空气对流;(3)尽可能远离房门、窗、散热器以及空调装置的出风口;(4)仪器应放置在水平、平稳的工作台上;(5)工作台应设置在受振动干扰少的地方;(6)应使仪器远离带有磁性或能产生磁场的物体及设备;(7)不得在具有爆炸性危险的区域内使用仪器;(8)不得长时间在高湿度或高粉尘的环境中使用仪器。2、设备安装(1)拆箱后,除去一切包装,取掉缓冲海绵;(2)将混合器置于稳定无振动的工作台上,尽可能水平;(3)将电源适配器输出端插在位于仪器后方电源插口内三、操作方法:普通款点动模式:1、将开关按到点动模式,面板上的点动指示灯亮起,转速不可调;2、将带混合样品管放置在标准头中心位置,并使样品管保持垂直;3、轻轻按压样品管,使标准头开始振荡;4、混匀完成后将样品管与标准头分离,仪器停止运行。连续运行模式:1、将标准头替换成通用夹具,并拧上螺丝使其紧固;2、将装有混合样品的离心管均匀插入试管模块,各试管中的混合样品应大致相等,将试管模块放入通用夹具并扣紧;3、将开关按到连续运行模式,连续运行灯亮起,转速不可调;4、仪器开始运行,运行完成后,将开关处在中间档时仪器关闭。调速款:点动模式:1、点击“Touch/Cont”键切换至点动模式,面板上的点动指示灯亮起,转速可调;2、将调速旋钮逆时针旋转至最低转速;3、将带混合样品管放置在标准头中心位置,并使样品管保持垂直;4、轻轻按压样品管的同时缓慢旋转调速旋钮,调整至所需转速,标准头开始振荡;5、混匀完成后将样品管与标准头分离,仪器停止运行。连续运行模式:1、将标准头替换成通用夹具,并拧上螺丝使其紧固;2、将装有混合样品的离心管均匀插入试管夹具,各试管中的混合样品应大致相等,将试管夹具放入通用夹具并扣紧;3、将调速旋钮逆时针旋转至最低转速;4、点击“Touch/Cont”键切换至连续运行模式,连续运行灯亮起,转速可调;5、缓慢旋转调速旋钮,设定至所需转速,仪器开始运行;6、运行完成后,将开关处在中间档时仪器电源关闭。数显款:点动模式:1、点击“Touch/Cont”键切换至点动模式,面板上的点动指示灯亮起;2、按压旋钮进行参数设置,旋转旋钮,设定至所需转速;3、将带混合样品管放置在标准头中心位置,并使样品管保持垂直;4、轻轻按压样品管,标准头开始振荡,转速上升至设定转速,开始累计计时;5、混匀完成后将样品管与标准头分离,仪器停止运行,计时清零。连续运行模式:1、将标准头替换成通用夹具,并拧上螺丝使其紧固;2、将装有混合样品的离心管均匀插入试管夹具,各试管中的混合样品应大致相等,将试管夹具放入通用夹具并扣紧;3、将调速旋钮逆时针旋转至最低转速;4、点击“Touch/Cont”键切换至连续运行模式,连续运行灯亮起,转速可调;5、旋转调速旋钮,设定至所需转速;6、点击调速旋钮切换至定时模式,旋转旋钮设定所需定时时长;7、点击“Stop/Run”键仪器开始运行,转速上升至设定转速,开始倒计时。若定时为“0”,则长时间运行;8、运行完成后,仪器自动停止运行,若定时为“0”,则需点击“Stop/Run”键使仪器停止运行。四、维护保养1、保持仪器清洁,防止溶液流入仪器内部;2、可用沾有中性洗涤剂的软布擦拭振头、机身、脚垫,再用占有蒸馏水的软布清楚洗涤剂;3、长时间停用时请将仪器断电,并与仪器附件一同置于防尘套妥善保管。
分子生物学研究中常用的dna纯化的方法有哪些
现代生物技术常用技术一般包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程和蛋白质工程。
基因工程(genetic engineering)又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。
通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株,并可以产生新的物种或品系。
酶工程(英语:Enzyme engineering)又称蛋白质工程学,是指工业上有目的的设置一定的反应器和反应条件,利用酶的催化功能,在一定条件下催化化学反应,生产人类需要的产品或服务于其它目的的一门应用技术。
发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
蛋白质工程就是通过对蛋白质化学、蛋白质晶体学和蛋白质动力学的研究,获得有关蛋白质理化特性和分子特性的信息,在此基础上对编码蛋白质的基因进行有目的的设计和改造,通过基因工程技术获得可以表达蛋白质的转基因生物系统,这个生物系统可以是转基因微生物、转基因植物、转基因动物,甚至可以是细胞系统。
如何对提取的DNA纯化
质粒DNA的提取、纯化和电泳检测
摘要
本实验通过碱变性法提取E.coli DH5α(pUC19)的质粒DNA,并且通过一系列的分离纯化技术将其质粒DNA与染色体DNA、RNA、蛋白质等杂质分开从而得到纯化的质粒DNA分子。通过琼脂糖凝胶电泳可以通过DNA条带的位置来大致判断其分子大小,也可以将实际电泳的结果和理论结果相对比,分析差异产生原因,从而完善实验方法,严谨实验步骤。
关键词碱变性法分离纯化技术琼脂糖凝胶电泳
引言
质粒是细菌细胞中与主染色体共存、可自主复制的一段大多数呈环形的DNA。细菌质粒的相对分子质量大小从1kb至200kb以上不等。一些质粒永远独立于染色体之外,另外一些质粒在一定条件下会可逆地整合到寄主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。质粒在基因工程中质粒常被用做基因的载体。目前,已发现有质粒的细菌有几百种,已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(DNA)。质粒在基因工程中是一类重要的载体,其作用主要是携带一些基因片段(可以是编码基因,也可以是调控区等),在细胞内环境中进行表达或参与通路的相互作用,通过将质粒转化到宿主细胞可以探究基因相互作用关系,取得蛋白产物,实现特定基因片段的克隆等。总之,质粒在生物科学研究方面具有广泛的作用。
提取和纯化质粒DNA的方法很多,目前常用的有:碱裂解/碱变性法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-***化铯密度梯度离心法和Wizard法等。其中,碱变性提取法最为经典和常用。碱裂解/碱变性法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的的分离方法。在pH12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性;质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离。当以pH4.8的KAc高盐缓冲液调节其pH值至中性时,变性的质粒DNA恢复原来的构型,保存在溶液中;染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来,通过离心被除去。最后,质粒DNA用冰乙醇沉淀获得。由于DNA和RNA性质类似,乙醇沉淀DNA的同时,也伴随着RNA沉淀,可利用RNaseA将RNA降解。质粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白,可通过酚/***仿抽提除去,最后获得纯度较高的质粒DNA。
电泳(electrophoresis)是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极移动的现象。各种生物大分子在一定pH条件下,可以解离成带电荷的离子,在电场中会向相反的电极移动。凝胶电泳是分子生物学的核心技术之一。凝胶是电泳支持介质,具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中,其中的电离子会发生移动,此时移动的速度可因带电离子的大小、形态及电荷量的不同而有差异。利用移动
速度差异,就可以区别各种大小不同的分子。因而,凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA片段。
正文
1.材料和方法
1.1材料和试剂
实验材料:E.coli DH5α(pUC19)。
实验试剂:LB液体培养基、氨苄青霉素(Amp)母液(储存浓度100mg/mL)、溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mMTris-HCl,10mM EDTA (pH 8.0);溶液Ⅱ:0.2MNaOH,1% SDS;溶液Ⅲ:5MKAc(pH 4.8);TE溶液:10mM Tris-HCl,1mM EDTA (pH 8.0);冰乙醇、70%乙醇、RNase A、Tris饱和酚、***仿/异戊醇混合液、酚/***仿/异戊醇(PCI)(25:24:1)混合液、3M NaAc溶液、灭菌双蒸水ddH2O、50×TAE缓冲液、10mg/mL溴化乙锭(EB)溶液、6×上样缓冲液(6×loading buffer)。
1.2实验方法
大肠杆菌的增值
用牙签从LB固体培养基挑取E.coli DH5α(pUC19)菌落于LB+Amp(Amp工作浓度为100μg/mL)液体培养基中,置于37℃、200rpm培养箱下振荡过夜培养。
实验前准备
(1)用搪瓷杯取一杯冰。
(2)将小烧杯放在天平上,调至平衡。
(3)配置80ml溶液Ⅱ: 将原液10M NaOH,10% SDS配制成0.2M NaOH,1% SDS。取用8ml SDS,1.6ml NaOH和70.4ml蒸馏水配置。
3. E.coil菌株的收获( 4°C操作)
(1)取一个灭菌离心管,称重,标记为W1 14.552g
(2)倒入菌液至距瓶口1/3处,两两配平
(3) 6000rpm,离心5min,弃上清
(4)加入5ml 溶液Ⅰ,涡旋, 6000rpm,5min,弃上清,称重为W2 14.676g,计算W2-W1 0.124g。
4.细胞裂解提取质粒DNA ( 4°C操作)
向菌体沉淀中量加入(按菌体量接近的重新分组,溶液Ⅰ补平)
(1)2.0 mL 溶液Ⅰ,充分涡旋振荡;用溶液Ⅰ再次配平
(2)4.0 mL溶液Ⅱ,轻柔颠倒混匀,冰浴3-5mi
(3)3.0 mL 溶液Ⅲ,轻柔颠倒混匀,冰浴5mi
(4)12000rpm, 15min;小心转移上清到新的离心管内,记录体积V。
(5)加入2V冰乙醇,颠倒混匀;-20℃,15min;。
(6)12000rpm,15min,弃上清。
(7)加入5mL70%乙醇,12000rpm,3min,吸弃上清。
(8)重复乙醇洗涤一次;37℃风干5-10min。
(9)分次加入0.5mL TE溶液两次,将沉淀吹开吹匀,并移到Ep管中,得质粒DNA粗提物
(10)加入5μl RNase A(10mg/ml),终浓度为50μg/mL,37℃孵育1-2小时。
5.质粒DNA的纯化
将1mL质粒DNA粗提物分出500μL到一新EP管中,使得每组两管。每个EP管进行如下操作:
(1)加入等体积的Tris饱和酚,涡旋振荡,12000rpm,5mi
(2)转移上清V1(两管均为400μL)至新管,加入V1的酚/***仿/异戊醇混合液,涡旋振荡(<1min),12000rpm,5mi
(3)转移上清V2(一管为400μL,一管为378μL)至新管,加入V2的***仿/异戊醇混合液,涡旋振荡(<1min),12000rpm,5mi
(4)转移上清V3(两管均为250μL)至新管,加入1/10 V3的3M NaAc溶液(pH=5.2),再加入2V4(V4=V3+1/10V3)的冰乙醇,震荡混匀,-20℃保存30mi
(5)12000rpm,15min,弃上清
(6)加入500μL 70%乙醇洗涤,12000rpm离心2min,弃上清
(7)重复洗涤一次,吸弃上清,37℃风干5mi
(8)每管加入25μL TE溶解沉淀,合并,得50μL纯化质粒DNA。
6. 1% 琼脂糖凝胶的制备
(1)配制2L 1×TAE:取40mL 50×TAE,用双蒸水将其稀释至2L
(2)正确组装制胶槽、制胶板、样品梳
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文档介绍:
(3)取40mL 1×TAE至250mL干净红盖瓶中,称量0.4g琼脂糖,混匀,轻旋瓶盖,微波炉加热沸腾3-4次,至溶液澄清无颗粒
(4)待溶液冷却至60℃左右,加入20μL 1mg/mL的溴化乙锭(EB)溶液,使EB溶液终浓度为0.5mg/L,混匀后倒入制胶槽中,冷却凝固待用(冷却凝固时间要在30min以上)。
7.电泳上样
(1)取2.0μL纯化DNA、2μL双蒸水、1μL上样缓冲液(6×loading buffer),用微量移液器吹吸混匀
(2)将凝胶连同制胶板一同放入电泳槽中,添加1×TAE至高出胶面约1mm
(3)将上述混合好的DNA样品,按照下表顺序,点样到凝胶中。。
8.凝胶电泳与DNA分离
(1)开启电泳仪电源,选择合适的电压120V和时间40mi
(3)将电泳槽电极与电泳仪连接。电泳槽红色电极为正极,与电泳仪正极相连。电泳槽黑色电极为负极,与电泳仪负极相连
(4)启动电泳,待观察到负极有气泡升起方可离开
(5)电泳结束,关闭电源,取出凝胶,在紫外灯下观察电泳条带。
2.实验结果
表 DNA样品加样顺序
泳道
DNA
样品/
marker
超螺旋marker
UC19
UC19/HindⅢ
1组DNA样品
2组DNA样品
3组DNA样品
4组DNA样品
5组DNA样品
超螺旋marker
样量
6μL
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
6μL
泳道
10
11
12
13
14
15
16
17
DNA
样品/
marker
6组DNA样品
6组DNA样品(阳性对照)
7组DNA样品
8组DNA样品
9组DNA样品
10组DNA样品
UC19
HindⅢ
UC19/
样量
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
5μL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
5,026
5,026
3,049
2,087
图碱裂解法提取质粒pUC19 DNA的琼脂糖凝胶电泳
泳道1与泳道9 加的样品是Supercoiled DNA Ladder Marker。supercoiled DNA Ladder Marker 由8种超螺旋的质粒DNA 构成,DNA大小分别为:2,087 bp、3,049 bp、3,997 bp、5,026 bp、6,133 bp、8,023 bp、10,085 bp、11,849 bp。其中5,026 bp的条带最亮。
泳道2与泳道17加的样品是pUC19质粒。DNA,即超螺旋的共价闭合环状结构的质粒DNA,其条带在2.7kb左右,起对照作用。
泳道3与泳道16加的样品是用HindⅢ酶切的pUC19质粒。HindⅢ酶切pUC19的结果是使超螺旋的共价闭合环状结构的pUC19质粒DNA的链断裂成线状的DNA, 线状DNA电泳速率减慢。但是实验中所用的HindⅢ没有将pUC19酶切充分,因此泳道3与泳道16电泳后会形成两条条带,其中暗带是被HindⅢ酶切的pUC19 质粒,明带是没有被HindⅢ酶切的pUC19质粒。
泳道11是没有加RNase的对照组的电泳图像,由于RNA易形成各种高级结构,同样大小的DNA和RNA相比,RNA的电泳速率快。泳道11下方的大量明带即为RNA电泳区域。
除了泳道15存在pUC19质粒所在区域条带,其他组的都无或无明显的pUC19质粒所在区域的条带,包括泳道15在内的所有组的条带位置都偏低,因为碱变性法有缺陷:容易导致不可逆的变性,不适合大质粒的抽提。碱裂解法是很剧烈的方法,质粒在碱性条件下会变性,时间一长,这种变性就是不可逆的了,我们碱变性时间太长,导致质粒DNA的变性不可逆,所以实际条带位置和预估不一样。
除了位置偏下的质粒DNA带以外,每一组都存在中间位置较弱的杂带(实心箭头所指),我们推测此杂带是没有被沉淀的,在加了有机物后涡旋震荡过程中所产生的线性染色体DNA的碎片,DNA,所以它的位置偏后。这一杂带在泳道4、7、8、10、12和16尤为明显。
个别组在加样孔下方也存在较窄的DNA条带(线性箭头所指),据推测,这种条带的产生是质粒DNA沉淀中少量染色体DNA杂质的存在而产生的,由于染色体DNA片段过大,1%的琼脂糖凝胶的分辨率有限,片段过大的DNA在电泳时速度极慢或很难穿过琼脂糖凝胶的孔径,因此,形成离上样孔近的较窄的杂带。这一杂带在泳道4、7、10和12尤为明显。
个别组在加样孔处也存在较弱的DNA条带(方形箭头末端所指),我们推测可能是没有除尽的蛋白质把加样孔堵住了,导致少数DNA无法从加样孔跑到凝胶当中去。这一杂带在泳道4、7、10和12尤为明显。
我们组的质粒DNA(0.124g)在泳道13,和其他泳道相比,我们的质粒DNA的条带稍微偏弱,这说明我们在组提取质粒DNA时有一定的DNA损失,但是我们组的DNA碎片和染色体DNA杂带也相对较弱,这可能和我们所提取的DNA量较少有关(和泳道4对照,由于此组提取的质粒DNA量较大,所获得的杂带也较明显。因此,不能因为我们组的杂带少而确定我们组的结果好),也有可能是我们的杂质除去得较为充分(和泳道14相比,我们组的杂带明亮程度和他们相近,但是我们的目标带明显比他们亮度高)。
3.讨论
加入5ml 溶液Ⅰ,涡旋的目的是重悬并洗涤菌体。溶液Ⅰ中葡萄糖的作用是为细胞提供等渗环境,
Tris-HCl作为pH缓冲液,为细胞提供适宜酸碱环境,EDTA(pH 8.0时溶于水)是重要金属螯合剂,可以与Mg2+、Ca2+等金属络合,抑制DNase对DNA的降解作用。离心后尽可能去除干净上清液,减少培养基对实验结果的影响。
加入2.0 mL 溶液Ⅰ的作用是重悬并洗涤菌体。
加入4.0 mL溶液Ⅱ的目的:①SDS能断裂分子内和分子间氢键,使分子去折叠,从而破坏蛋白质分子的二级结构和三级结构而达到裂解细胞的目的。加入溶液Ⅰ后,溶液变得清亮粘稠,变得清亮是由于细胞破碎了,粘稠是由于细胞内蛋白质等有机物析出。加入溶液Ⅰ要慢慢颠倒,使之混匀,不能烈震荡。震荡过于剧烈会使染色体DNA断裂成碎片,导致在质粒DNA中引入杂质。②NaOH的碱裂解作用和碱变性作用:NaOH可以与蛋白质结合(细胞膜含有蛋白质)从而破碎细胞;在pH12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,而质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离。因此可通过之后对pH值的调节达到分离染色体DNA与质粒DNA的目的。
此步骤等待时间不能过长,因为强碱也会破坏质粒DNA。
加入3.0 mL 溶液Ⅲ(5M KAc(pH 4.8))的作用是使质粒DNA复性,而染色体DNA太长难以复性从而沉淀出来。不能复性的染色体DNA与
简述DNA提取实验中钝化DNA酶的措施有哪些
纯化DNA的常用方法是用酚抽提-乙醇沉淀法,适用于普通实验室操作。它通过交替使用苯酚、氯仿两种不同的蛋白质变性剂,可以增加去除蛋白质杂质的效果;氯仿可以去除核酸溶液中的微量酚,还可以加快有机相与液相混合,去除色素和蔗糖;在氯仿中加入少量的异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。【实验材料】待纯化的DNA溶液。【实验仪器】高压灭菌锅,涡旋混匀器,台式高速冷冻离心机【试剂配制】1、Tris饱和酚(pH8.0):氯仿:异戊醇混合液酚:氯仿:异戊醇按体积比25:24:1配制,现配现用。2、氯仿:异戊醇混合液氯仿:异戊醇按体积比24:1配制,现配现用。3、醋酸钠溶液配制3 mol/L的醋酸钠溶液,调节pH值至5.2。4、TE缓冲液10 mmol/L Tris·HCl(pH 8.0),1 mmol/LEDTA(pH 8.0),配制完成后高压灭菌,4 ℃保存。【实验步骤】1、在待纯化的DNA溶液中加等体积的酚:氯仿:异戊醇混合液,然后在涡旋混匀器上充分混匀。2、将混合物12000 r/min离心10 min后,移取上层含DNA的水相到另一离心管中。如果在水相和有机相交界处有白色沉淀物,则需要重新抽提水相,直到两相交界处无明显沉淀物。3、向上层水相中加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1)混合液,在涡旋混匀器上充分混匀后12000 r/min离心10 min。4、移取上层含DNA的水相到另一离心管中,加1/10体积的醋酸钠溶液,充分混匀,再向管中加入2.5倍体积的预冷无水乙醇,上下倒置混匀,于-20 ℃保存30 min。5、12000 r/min离心5 min,弃上清液;75%的乙醇12000 r/min离心洗涤5 min,弃上清液;用吸头将管壁残留的乙醇去除,室温干燥10-15 min(不要等DNA沉淀完全干燥,否则DNA不易溶解)。~ 1 / 2 ~6、在盛有干燥DNA的离心管中加入适量TE缓冲液,溶解后在-20 ℃以下长期保存。
一次性口罩熔喷布过滤效率检测效果用什么仪器?
一次性口罩熔喷布过滤效率检测一般需要两台仪器,一台是颗粒物过滤效率测试仪,一台是细菌过滤效率测试仪,前者是必需,后者看口罩类型需求,标准集团的还可以,不错。 颗粒物过滤效率测试仪用于测试一次性医用口罩、医用外科口罩、普通口罩等日常防护型口罩的颗粒物过滤效率。 适用标准: GB 32610-2016日常防护型口罩技术规范 GB 2626-2019呼吸防护用品-自吸过滤式防颗粒物呼吸器 GB 19082-2009医用一次性防护服技术要求 GB 19083-2010医用防护口罩技术要求 YY 0969-2013一次性使用医用口罩 YY 0469-2011医用外科口罩 主要参数: 1.气溶胶发生器产生粒径分布:0.02-2μm; 2.气溶胶浓度检测装置: 浓度≤30mg/m3,检测动态范围:0.0-999.9mg/m3,精度1%, 采样频率:≥1次/min,并配有中和气溶胶发生器荷电的装置; 3.试验头模:国标头模; 4.呼吸模拟器:正弦气流,口罩颗粒物防护效果测定仪,频率20次/min,呼吸流量(30±1)L/min,口罩颗粒物防护效果测试仪,呼吸速度可调; 5.过滤效率检测范围:0-99.999%; 6.电源:AC220V 50Hz。 细菌过滤效率测试仪采用双气路同时对比采样方法,用于测试一次性医用口罩、医用外科口罩、民用口罩等日常防护型口罩及生产口罩用熔喷布的细菌过滤效率。 适用标准: YY0469-2011《医用外科kou罩技术要求》中附录B细菌过滤效率(BFE)试验方法第B.1.1.1 Q/0212 ZRB003-2011医用外科kou罩细菌过滤效率 ASTMF2100、ASTMF2101、欧洲EN14683 主要参数: 1、A路采样流量:参数范围,28.3L/min;分辨率,0.1L/min;允许误差:优于±2.5%; B路采样流量:参数范围,28.3L/min;分辨率,0.1L/min;允许误差:优于±2.5%; 2、喷雾流量:参数范围,(8~10)L/min;分辨率,0.1L/min;允许误差:优于±5.0%; 3、蠕动泵流量:参数范围,(0.006~3.0)mL/min;分辨率,0.001ml/min;允许误差:优于±2.5%; 4、A路流量计前压力:参数范围,(-20~0)kPa;分辨率,0.01kPa;允许误差:优于±2.5%; B路流量计前压力:参数范围,(-20~0)kPa;分辨率,0.01kPa;允许误差:优于±2.5%; 5、喷雾流量计前压力:参数范围,(0~300)kPa;分辨率,0.1kPa;允许误差:优于±2.5%; 6、气雾室负压:参数范围,(-90~-120)Pa;分辨率,0.1Pa;允许误差:优于±2.0%; 7、数据存储能力:>100000组; 8、高效空气过滤器特性:对0.3um以上粒子的过滤效率≥99.99%; 9、气溶胶发生器质量中值直径:平均颗粒直径(3.0±0.3)μm,几何标准差≤1.5。