核酸染料加热会失效吗
不会失效。
常用的核酸染料有：
1、EB（溴化乙锭）是高度灵敏的嵌入性芳香族荧光化合物，为强致癌诱变剂，但价格便宜，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。
2、GoldView I型/II型染料是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于RNA染色。
3、GelRed和GelGreen属于大分子产品，经过埃姆斯 AMS 和相关测试，结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB），是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
4、SYBR Green 和SYBR Gold于1995 年由 Molecular probes 公司推出，是一种高灵敏的核酸染料，稳定性差。
核酸染料的使用方法
下文摘自索莱宝技术文章
GelRed 是一种高灵敏、低毒性和超安全的荧光核酸凝胶染色试剂。它可替代溴化乙锭（EB），并且远高于EB的灵敏度，同时不需要脱色。由于GelRed和EB有相同的光谱特性，因此用它替代EB时不需要更换成像系统。GelRed既可用于预制凝胶也可用于电泳后染色。通常电泳后染色的灵敏度更高，并能排除染料对DNA迁移的干扰 。使用 GelRed进行电泳后染色，操作简单，不需要脱色和特殊溶液。只要将染料稀释在 0.1M NaCl 中，并将凝胶置于染色液中， 30 分钟后就可以观察。染色液在室温下极为稳定，可以多次反复使用。相比而言，预制凝胶由于不需要额外染色过程，因此染料用量更少，更为简单经济。
GelRed核酸染料的特点：
Gelred其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。
重要提示：
1、无 毒 性：GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远小于EB。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。
2、灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
3、稳定性高： 可以使用微波炉加热，可以在室温下保存。
4、信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
5、操作简单：与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
6、适用范围广：适用于预制凝胶（胶染法）和凝胶电泳后染色（泡染法）。
7、与标准凝胶成像系统完美兼容 ：使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时， GelRed 可以完美的替代 EB。
DNA电泳，用什么核酸荧光染料效果好，毒性低
电泳后,核酸需经染色才能显色出带型,常用以下核酸染色剂：1、溴化乙锭（ethidium bromide,EB）最常用的核酸荧光染料,可嵌入核酸双链的配对碱基之间,在紫外线激发下,发出桔红色荧光.EB-DNA复合物中的EB发出的荧光,比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍,因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型.若EB背景太深,可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCl2中5min,使非结合的EB褪色,这 样可检查到10ng的DNA样品,EB也可用于检测单链DNA或RNA,但其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率也相对较低.在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB,染色可在电泳过程中进行,能随时观察核酸的迁移情况.但EB带正电荷,嵌入碱基后增加了 核酸分子的刚性,使迁移率减慢,故不宜用于测定核酸分子量的大小,这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色.EB见光 易分解,应于4℃避光保存,2、吖啶橙（acridine orange,AO）：吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间,在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合,在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光.因此可区分单链和双链核酸,灵敏度分别为0.1μg和0.05μg.但吖啶橙的染色操作要求严格,应在 22℃,0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min,然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时.3、银（Ag+）试剂：Ag+与核酸形成稳定复合物,然后用甲醛使Ag+还原成银颗粒.AgNO3等试剂可使聚丙烯酰胺凝胶上的单链,双链DNA及 RNA都染成黑褐色.银染法的灵敏度比EB染色高200倍左右,比亚甲蓝染色高100~1000倍,在小于0.5mm厚的凝胶中,能检测出0.5ng的 RNA,其缺点是专一性不强,能与蛋白质,去污剂反应也产生褐色,而且对DNA的染色定量不准确.银与DNA稳定结合,对DNA有破坏作用,不适于DNA 片段回收的制备.4、亚甲蓝（methylene blue）可将RNA染成蓝色,但灵敏度不高,而且操作时间长.胶浸泡于0.02%的亚甲蓝,10mmol/L Tris-Ac（pH8.3）,4℃放置1~2h,用净水洗5~8h（反复换水）,带型肉眼可见,最低检测量为 250ng.
