sgrna是 靶标基因序列 上的一段吗
几个基因有一段核苷酸序列重叠在一起。重叠基因中不仅有编码序列也有调控序列，大基因内包含小基因。重叠基因有多种重叠方式，更重要的可能是参与对基因的调控如何确定一段dna序列是一个基因所谓重叠基因是指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列，能经济和有效地利用DNA遗传信息量；前后两个基因首尾重叠一个或两个核苷酸；几个基因的重叠，或是指一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分，说明基因的重叠不仅是为了节约碱基。例如，等等
经过半学期的学习，同学们知道周围看得见的花鸟虫鱼都是生物，一些微小的细菌、病毒，尽管看不见，摸不着
生物具有一下特征：1、生物的生活需要营养．2、生物能够进行呼吸．3、生物能排出体内产生的废物．4、生物能够对外界刺激作出反应．5、生物能够生长和繁殖．6、除病毒外，生物都是由细胞构成的．葱具有生物的特征属于生物；枯叶生物的遗物，不是生物；珊瑚是珊瑚虫分泌的外壳，不是生物；钟乳石不能呼吸，不能繁殖，不属于生物．故选：A．
如何检测 crispr 基因敲除成功
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件[1]。目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统[1]。通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作[2,3]。目前常用的CAS9研究方法是通过普通质粒,质粒构建流程如下：Cas9质粒构建目前常见的CAS9普通质粒有（汉恒生物提供cas9质粒试剂盒）：虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果，但是质粒转染具有效率低，作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题，常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒，慢病毒常用质粒见addgene（lentiCRISPR v2，lentiGuide-Puro，lentiCas9-Blast），慢病毒可以整合入宿主基因组中，长期稳定的表达（汉恒生物提供CRISPR/cas9 慢病毒包装），但是由于慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比较大（大于4kb），且长期插入可能导致乱切，脱靶等，同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因，腺病毒更有优势，腺病毒克隆能力强，获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说，作用是时间也比较长，可以达到更理想的敲除效果。
